Técnicas 2: Microscopía

El microscopio se emplea para ampliar una imagen a un nivel en el que la retina pueda resolver la información que, de otro modo, estaría por debajo de su límite de resolución.

El poder de resolución es la capacidad de una lente para obtener imágenes separadas de objetos que están muy juntos. Esta resolución depende, además del sistema óptico, de la longitud de onda de la luz, del espesor de la muestra, la calidad de la fijación y de la intensidad de la tinción.

1. Microscopía óptica

 Microscopio óptico: uso correcto del microscopio óptico

La iluminación Köler es una clave fundamental para la buena microscopía. Los pasos para del ajuste para conseguir una buena iluminación de Köler:

• Se enfoca la muestra.
• Se cierra el diafragma de campo.
• Se enfoca el condensador hasta que el contorno de su diafragma de campo aparezca bien nítido en el foco.
• Se centra el diafragma de campo y después se abre dicho diafragma hasta que la luz cubra todo el campo observado.
• Se retira el ocular y se observa la pupila de salida del objeto. Se irá cerrando el diafragma del condensador hasta cubrir dos terceras partes de la abertura del objetivo. 
  

Otros sistemas ópticos

-Microscopio de contraste de fases: empleado para aumentar el contraste sin teñir, aprovechando la diferencia de refracción que existe entre las diferentes partes de una muestra.

-Microscopio de campo oscuro: está equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con mucha intensidad y de forma oblicua. Así el campo de visión aparece como un fondo oscuro en el que las partículas pequeñas de la muestra que reflejan parte de la luz en el objetivo aparecen brillantes.

-Microscopio de fluorescencia: se emplea para visualizar moléculas con fluorescencia natural o autofluorescencia y con fluorescencia secundaria, al exponerlas a una fuente de luz ultravioleta. Ejemplos de dichas moléculas: vitamina A, algunos neurotransmisores y anticuerpos.

-Microscopio ultravioleta: la imagen generada en él va a depender de la luz ultravioleta que sea capaz de absorber las moléculas de la muestra. Esta microscopía se asemeja al funcionamiento de un espectrofotómetro, ya que los resultados se registran de forma fotográfica. La muestra no se puede observar directamente a través de una lente, ya que la luz UV no es visible y dañaría el ojo.  Es útil para estudiar ácidos nucleicos, proteínas que contienen determinados aminoácidos y para determinar cuantitativamente la cantidad de ADN Y ARN.

-Microscopio confocal de barrido: permite observar una muestra en tres dimensiones. Utiliza un sistema de iluminación láser, fuertemente convergente y movida por un sistema de espejos a través de la muestra, que produce una luz de alta intensidad. Un programa informático reconstruirá la imagen a partir de los datos registrados durante la exploración de la muestra.

3. Microscopía electrónica

Hay dos tipos principales de microscopios electrónicos:

-Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza la interacción de un haz de electrones con la muestra para producir la imagen.

-Microscopio electrónico de barrido (MEB): utiliza un haz de electrones que barre la superficie de la muestra. Las imágenes creadas son tridimensionales y muestran la estructura superficial de la muestra.

4. Microscopía de fuerza atómica

En el microscopio de fuerza atómica una sonda puntiaguda muy fina explora la muestra a lo largo del eje x, repitiendo la exploración en varios intervalos a lo largo del eje y. Una gran ventaja de este sistema es que, a diferencia de los sistemas ópticos, permite la visualización de muestras que no estén en vacío. Por ejemplo  de células vivas y de su medio circundante.

5. Microscopía virtual

Es un procedimiento digital que se emplea como alternativa al examen de portaobjetos de vidrio con el microscopio óptico. Combina la microscopía óptica convencional con la tecnología digital. La muestra virtual obtenida es una representación digital del preparado, que se podrá observar sin la necesidad de un microscopio óptico.